本文作者
李洋张相萍翟明强黄学勇李懿
安阳市疾病预防控制中心微生物检验科；河南省疾病预防控制中心传染病预防控制所
摘要
调查—年安阳地区手足口病（hand，footandmouthdisease，HFMD）相关人肠道病毒B种（HEV-B）病原组成，对柯萨奇病毒B2（CVB2）和柯萨奇病毒B5（CVB5）VP1基因特征进行研究。
使用实时荧光逆转录PCR和半巢式逆转录PCR法对柯萨奇病毒A16（CVA16）、肠道病毒71（EV71）以及其他肠道病毒进行鉴定，以获得完整的手足口病病原组成，统计出HEV-B病原种类及阳性比例。针对HEV-B病原中阳性病例数较多的CVB2和CVB5病原，分别以其VP1基因为靶段设计引物PCR扩增测序后获得VP1基因核苷酸序列全长。使用MEGA7.0和BioEdit7.2软件对本研究获得的CVB2、CVB5序列以及GenBank数据库已收录的全部相关VP1序列构建系统发育树并进行系统发育分析。使用DateMonkey在线分析程序对我国近年来流行的CVB2和CVB5毒株的VP1基因进行选择压力分析。
—年安阳地区共鉴定出手足口病相关HEV-B病原14种，HEV-B阳性标本57份。HEV-B病原占手足口病全部病原种类的比例为56%，HEV-B阳性标本占总肠道病毒阳性标本的比例为3.06%。绝大多数HEV-B病原引起的手足口病呈高度散发，个别病原如CVB2、CVB5在特定时间内的病例较为聚集。经过测序获得安阳地区8条CVB2和9条CVB5VP1序列。构建的系统发育树显示，CVB2毒株可分为A～D四个基因型，各基因型的组间平均进化距离介于0.～0.，核苷酸序列相似性介于79.7%～85.8%。CVB5毒株可分为A～F六个基因型，各基因型的组间平均进化距离介于0.～0.，核苷酸序列相似性介于76.0%～86.8%。CVB2VP1基因氨基酸序列第、位，CVB5VP1基因氨基酸序列第75、90、95位在不同基因型毒株中的残基有较大差异。安阳地区CVB2序列均属于D基因型，且集中于1个分支内；CVB5序列均属于F基因型，分布于其中2个分支内。中国大陆地区近年流行的CVB2（D基因型）和CVB5（F基因亚型）毒株的进化选择压力ω值分别为0.、0.，未发现CVB2VP1基因的正选择氨基酸位点，但在CVB5VP1基因中发现6处正选择氨基酸位点。
HEV-B是安阳地区—年手足口病病原谱的重要组成。CVB2、CVB5在安阳地区手足口病HEV-B病原中占有一定优势，其中CVB5VP1基因比CVB2VP1基因具有更为复杂和活跃的进化特征。手足口病；肠道病毒；柯萨奇病毒B2；柯萨奇病毒B5；系统发育树；正向选择压力
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